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凝膠制備中有哪些方法

更新時間:2013-09-03 點擊量:2298

凝膠制備中有哪些方法

凝膠制備:

1.玻璃板對齊后放入夾中,垂直卡緊,加滿水檢漏。

2.配10%分離膠,APS和TEMED作用為促凝,zui后灌膠前加。若板不漏水,則將水倒出,并用吸水紙洗凈后灌膠,灌至大約3/4處,上面加滿水壓平。

3.配濃縮膠,同樣地,APS和TEMEDzui后加,分離膠灌入約30min后觀察小燒杯中剩余分離膠是否已凝,同時仔細觀察可見玻板水和膠間有一條折線,說明膠已凝固。

4.將上面的水倒去,吸水紙洗凈,灌入濃縮膠,灌滿,注意一定不要有氣泡,然后將梳子插入,注意保持水平,約30min后凝固可用。

5.拔梳子在電泳緩沖液中拔,加樣孔用小針筒沖洗干凈再上樣,注意上樣時勿使樣品逸至鄰孔,樣品混勻時要輕,不要產生氣泡,否則加樣時易導致逸出而使結果不準確。

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 酶譜法的基本過程是先將樣品進行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明膠)電泳分離,然后在有二價金屬離子存在的緩沖系統中使樣品中的MMP-2和MMP-9恢復活性,在各自的遷移位置水解凝膠里的明膠,zui后用考馬斯亮藍將凝膠染色,再脫色,在藍色背景下可出現白色條帶,條帶的強弱與MMP-2和MMP-9活性成正比。咨詢詳細信息。

 

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