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IgA的純化操作步驟

更新時間:2013-08-23 點擊量:3155

 
IgA的純化
 
    血清中IgA的含量較低,一般從乳汁中提取分泌型IgA。
 
   【材料和試劑】
(1)人初乳Xml。
(2)生理鹽水(NS),HCl。
(3)2mol/L Tris,0.1mol/L pH6.3 PB。
(4)0.01mol/L, pH7.5(含0.1mol/L NaCl)和0.01mol/L,pH7.7(含0.25mol/L NaCl)的PB。
 
   【操作步驟】
(1)取Sephadex G-200 25g,經蒸餾水充分膨脹后,以0.01mol/L,pH6.3的PB平衡并裝柱,柱床體積為2.5cm×100cm。
(2)將10ml NS緩慢加入初乳中,混勻,43000r/min 4℃離心60min。
 
(1)吸出中層乳清液,以1mol/L HCl調至pH4.0,4℃ 24000r/min離心30min。
(2)吸取上清以2mol/L Tris 調至pH7.3,同上離心,取上清,以0.45μm硝酸纖維素膜過濾。
(3)收集濾出液過Sephadex G-200層析柱,以0.01mol/L,pH6.8 的PB低溫洗脫,0.3~0.5ml/min,分部收集,并以紫外監測儀280nm監測。
(4)*峰以IgM為主,第二峰為IgA,第三峰為IgG,收集合并第二峰各管,裝入透析袋中。
(5)對0.01mol/L,pH7.5(含0.1mol/L NaCl)的PB透析4~6h。
(6)過DEAE-Sephadex A-50柱,以0.01mol/L,pH7.5(含0.1mol/L NaCl)的PB洗脫至OD 280nm< 0.02。
(7)改用含0.25mol/L NaCl的PB洗脫,分部收集,280nm測蛋白峰,收集合并含蛋白的洗脫峰,濃縮后置-20℃保存。
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純化抗體  
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羊抗小鼠 IgG  1mg
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羊抗小鼠 IgG  100mg
羊抗兔 IgG  1mg
羊抗兔 IgG  10mg
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羊抗人 IgM  1mg
羊抗人 IgM  10mg
羊抗人 IgM  100mg
羊抗人 IgA  1mg
羊抗人 IgA  10mg
羊抗人白蛋白  1mg
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